К вопросу о подготовке амниотической мембраны в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций роговицы
Год: 2019, том 15 Номер: №2 Страницы: 409-413
Рубрика: Глазные болезни Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Александрова О.И, Гаврилюк И.О., Машель Т.В., Черныш В.Ф., Чурашов С.В., Куликов А.Н., Блинова М.И.
Организация: ФГБУН «Институт цитологии РАН», ФГБВОУ "Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова", ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет»
Рубрика: Глазные болезни Тип статьи: Оригинальная статья
Авторы: Александрова О.И, Гаврилюк И.О., Машель Т.В., Черныш В.Ф., Чурашов С.В., Куликов А.Н., Блинова М.И.
Организация: ФГБУН «Институт цитологии РАН», ФГБВОУ "Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова", ФГАОУ ВО «Санкт-Петербургский политехнический университет»
Резюме:
Цель: определить необходимую подготовку амниотической мембраны (АМ), позволяющую использовать ее в качестве скаффолда для культивируемых клеток при создании биоинженерных конструкций (БИК). Материал и методы. Нативную АМ иммобилизировали в специальном зажимном устройстве и подвергали дополнительной механической, термической и ферментативной обработке: удаляли остатки слизи с ее поверхности, проводили криоконсервирование АМ-скаффолдов при –80оС, –20оС и их децеллюляризацию 0,25 %-м раствором смеси Tripsin-EDTA. Прижизненную оценку морфологии культивируемых на АМ- скаффолдах клеток осуществляли под инвертированным микроскопом Nikon Eclipse TS100, оснащенным фотокамерой. Жизнеспособность и метаболическую активность клеток АМ определяли посредством МТТ-теста с помощью планшетного спектрофотометра АИФР-01 УНИПЛАН (Пикон, Россия) при длине волны 570 нм и референсной длине волны 620 нм. Результаты. Установлено, что присутствие на поверхности нативной АМ остатков слизи, не удаляющихся при стандартной механической обработке, негативно влияет на выживаемость клеточной тест-системы. Определена возможность криоконсервации АМ-скаффолдов, а также выявлено позитивное влияние процессов их криоконсервации и ферментативной децеллюляризации на жизнеспособность культивируемых на скаффол-дах клеток. Заключение. Стандартная механическая обработка нативной АМ не гарантирует полную очистку ее поверхности от остатков слизи, которые мешают адгезии и равномерному распределению культивируемых клеток. Необходимо достоверно контролируемое удаление слизи поверхности АМ перед их иммобилизацией и дальнейшими манипуляциями. Криоконсервация и последующая децеллюляризация АМ-скаффолдов способствуют увеличению жизнеспособности клеточной тест-системы. Оптимальным из исследуемых субстратов для культивирования клеток оказались АМ-скаффолды, очищенные от амниотической слизи, прошедшие кри-оконсервацию при –80оС в смеси DMEM-F12 и DMSO (1:1) и ферментативную децеллюляризацию после размораживания.
Литература:
1 Черныш В. Ф., Бойко Э. В. Ожоги глаз: Состояние проблемы и новые подходы. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2017; 184 с.
2 Burman S, Tejwani S, Vemuganti GK, et al. Ophthalmic applications of preserved human amniotic membrane: a review of current indications. Cell and tissue banking 2004; 5 (3): 161–75
3 Lavker RM, Tseng SCG, Sun TT. Corneal epithelial stem cells at the limbus: looking at some old problems from a new angle. Experimental eye research 2004; 78 (3): 433–46
4 Гаврилюк И. О., Александрова О. И., Хорольская Ю. И. и др. К вопросу о заборе, выделении и культивировании стволовых клеток эпителия слизистой полости рта. Современные технологии в офтальмологии 2018; (4): 60–3
5 Дубовиков А. С., Безушко А. В., Гаври-люк И. О. и др. Исследование возможности применения культивированных на амниотической мембране лимбальных эпителиальных эпителиальных стволовых клеток для лечения лимбальной недостаточности в эксперименте. Современные технологии в офтальмологии 2017; (4): 72–5
6 Дубовиков А. С., Безушко А. В., Куликов А. Н. и др. О применении культивированных на амниотической мембране стволовых клеток роговичного эпителия для устранения лимбальной недостаточности в эксперименте. Практическая медицина 2017; 2 (9 (110)): 67–71
7 Nakamura T, Inatomi T, Sotozono C, et al. Ocular surface reconstruction using stem cell and tissue engineering. Progress in retinal and eye research 2016; 51: 187–207
8 Ситник Г. В. Современные клеточные биотехнологии в офтальмологии: Амниотическая мембрана как субстрат для культивирования стволовых эпителиальных клеток. Медицинский журнал 2006; (4): 16–9
9 Абрамова И. А., Бойко Э. В., Черныш В. Ф. Об использовании амниотической мембраны с целью конъюнктивальной пластики в эксперименте. Офтальмохирургия 2004; (3): 8–12
10 Endo KI, Nakamura T, Kawasaki S, Kinoshita S. Human amniotic membrane, like corneal epithelial basement membrane, manifests the alpha-5 chain of type IV collagen. Investigative Ophthalmol 2004; 45 (6): 1771–4
11 Solomon A, Rosenblatt M, Monroy D, et al. Suppression of interleukin 1alpha and interleukin 1beta in human limbal epithelial cells cultured on the amniotic membrane stromal matrix. Br J Ophthalmol 2001 85 (4): 444–9
12 Мурзабекова Ф. А. Двойное кератоамниопокрытие в системе хирургического лечения язвенных процессов роговицы: автореф. дис. … канд. мед. наук. М., 2007; 25 c.
13 Jirsova K, Jones GLA. Amniotic membrane in ophthalmology: properties, preparation, storage and indications for grafting: a review. Cell and tissue banking 2017, 18 (2): 193– 204
14 Kubo M, Sonoda Y, Muramatsu R, Usui M. Immunogenicity of human amniotic membrane in experimental xenotransplantation. Invest Ophthalmol Vis Sci 2001; 42 (7): 1539–46.
| Прикрепленный файл | Размер |
|---|---|
| 2019_02-1_409-413.pdf | 1.63 Мб |
Русский
English